Курсовая работа: Свойства кисломолочных напитков при хранении
Существующие в настоящее время микробиологические автоматизированные
системы на основе импедансных технологий позволяют получать быстрые (в течение
нескольких часов) и надежные результаты для большого числа одновременно
исследуемых образцов. В основе метода импедансной микробиологии лежит измерение
изменения электрической проводимости питательной среды под воздействием роста микроорганизмов,
что впервые было показано Стюартом в 1898 году. Однако этот метод получил свое
развитие лишь в 70-е годы с появлением соответствующего электронного оборудования
и компьютерной техники. Импедансная микробиология является непрямым культуральным
методом обнаружения микроорганизмов путем определения электрического импеданса.
Изменение импеданса происходит в питательной среде по мере того, как ее химический
состав изменяется в результате роста и метаболической активности микроорганизмов.
При этом незаряженные или слабозаряженные составляющие питательной среды превращаются
в сильнозаряженные конечные продукты: белки метаболизируются до аминокислот,
углеводы и жиры до органических кислот. Эти электрохимические изменения приводят
к существенным изменениям импеданса, экспоненциальные изменения сигнала могут
наблюдаться, когда количество микробных клеток достигает порога 106 - 107
клеток/мл. Время, необходимое для достижения значимого изменения импеданса,
называется временем определения импеданса (IDT), значение которого обратно пропорционально
начальной концентрации микроорганизмов в пробе.
Среди разработанных и применяющихся в настоящее время исследовательских
микробиологических систем, предназначенных для ускоренного обнаружения микроорганизмов
на основе импедансных технологий, наибольшее распространение получил микробиологический
анализатор "Бак Трак 4100" производства австрийской фирмы "SY- LAB".
"Бак Трак 4100" является автоматизированной системой для ускоренной (в
течение 6 - 8 часов) количественной и качественной оценки степени микробного
загрязнения продуктов питания, питьевой воды, напитков, парфюмерно-косметической
продукции, контроля за стерильностью различных материалов и растворов.
Прибор автоматически определяет основные санитарно-значимые показатели
- мезофильные аэробы и факультативные анаэробы, бактерии группы кишечных палочек
(колиформы), патогенные микроорганизмы (в том числе сальмонеллы и листерии), сульфитредуцирующие
клостридии, лактобациллы, энтерококки, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, а
также дрожжи и плесени. Кроме того, прибор позволяет также определять наличие ингибиторных
веществ в различных продуктах и пищевом сырье. Главным преимуществом
микробиологического анализатора "Бак Трак 4100" по сравнению с
аналогичными приборами других фирм (благодаря наличию двух пар электродов в
измерительных ячейках) является одновременная регистрация двух параметров: М-параметр
- относительное изменение полного электрического импеданса (сопротивление + емкость)
питательной среды и Е-параметр - относительное изменение импеданса в зоне
двойного электрического слоя между электродами. Оба электрических параметра показывают
высокую степень корреляции с кривой роста, однако сдвиги в концентрации ионов, происходящие
в процессе жизнедеятельности микроорганизмов, сильнее влияют на Е-параметр, чем
на М-параметр, который описывает весь объем образца. В системе "Бак Трак 4100"
для обнаружения микроорганизмов, вызывающих незначительные изменения
проводимости питательной среды (дрожжи и плесени), используется метод "непрямого
импеданса". Сущность метода заключается в регистрации СО , образующегося в
2 процессе метаболизма микроорганизмов, в присутствии щелочи:
СО = 2ОН -> СО + Н О.
Наиболее существенным преимуществом метода "непрямого импеданса"
является его большая чувствительность. Так, методом "непрямого импеданса"
возможно определять 10 - 10 клеток дрожжей в мл, что на порядок ниже по сравнению
с прямым. Таким образом, измерительная система прибора "Бак Трак 4100"
реализует принцип разделения импедансного сигнала, регистрируя одновременно как
импеданс среды, так и электродный импеданс, а также позволяет проводить
измерения прямым и "непрямым методом", что делает возможным использование
любых (в том числе и отечественных) питательных сред для проведения
исследований.
3. Методики определения санитарно-показательных, потенциально
патогенных и патогенных микроорганизмов
3.1. Определение мезофильных аэробных и факультативных
анаэробных микроорганизмов
1. Среда BiMedia 001A (готовится в соответствии с инструкцией
- см. гл. 10).
2. Протокол измерения.
2.1. Дать среде BiMedia 001А уравновеситься при комнатной температуре
в течение 6 ч.
2.2. Установить температуру 30 -С на приборе "Bac
Trac".
2.3. В основном меню программы "Bac Trac"
установить следующие параметры:
Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters):
Время исследования (Duration) 24 ч
Масштаб измерений (Scale):
М-параметр 0 - 50%
Е-параметр 0 - 50%
Время задержки (Delay) 1 ч.
Пороговые значения (Thresholds): выбирается соответствующий калибровочный
файл для данного вида продукции и параметры пороговых значений вносятся
автоматически.
Учет результатов проводится по М-параметру.
3. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды
BiMedia 001A.
4. Внести 1 мл предварительно подготовленного в соответствии с
требованиями нормативной документации исследуемого образца продукта в
измерительную ячейку с 9 мл среды.
5. Тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями
(не переворачивать ячейку!).
6. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с
10 мл среды BiMedia 001А (без инокулята).
7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement)
и начать измерения.
8. После того как каждая позиция блока будет отмаркирована
как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор
"Вас Trac".
Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки
ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT)
будут записаны автоматически. При пересечении порогового значения происходит автоматический
подсчет численности микроорганизмов в исследуемом образце.
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ:
Результат определения КОЕ (CFU) выдается автоматически в виде
количества микроорганизмов в 1 мл исследуемого продукта. Если исследуется
твердый продукт, то результат определения КОЕ (CFU) необходимо умножить на степень
разведения (х 10) для получения КОЕ в 1 г продукта. Примечание. Основные этапы
создания калибровочного файла рассмотрены в гл. 4 данных Указаний.
3.2. Определение бактерий группы кишечных палочек - БГКП
(колиформ)
1. Среда BiMedia 160B (готовится в соответствии с инструкцией
- см. гл. 10).
2. Протокол измерения.
2.1. Установить температуру 37 -С на приборе "Bac
Trac".
2.2. В основном меню программы "Bac Trac"
установить следующие параметры:
Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters):
Время исследования (Duration) 24 ч
Масштаб измерений (Scale):
М-параметр 0 - 50%
Е-параметр 0 - 50%
Время задержки (Delay) 1 ч
Пороговые значения (Thresholds):
М-параметр 5%
Е-параметр 10%
Проводить учет результатов по М-параметру.
Пороговое значение по времени
(Time limit 1) 12 ч
Пороговое значение по времени
(Time limit 2) 18 ч.
3. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды
BiMedia 160B.
4. Добавить исследуемый образец из соответствующего
разведения продукта, в котором не допускается наличие БГКП.
4.1. Если наличие БГКП не допускается в 0,01 г продукта, то
для исследования берется 1 мл из разведения 1:100.
4.2. Если наличие БГКП не допускается в 0,1 г продукта, то для
исследования берется 1 мл из разведения 1:10.
4.3. Если наличие БГКП не допускается в 1 г продукта, то для исследования
берется 5 мл из разведения 1:5 и добавляется к 5 мл среды 160В двойной
концентрации.
Возможен также альтернативный вариант при использовании измерительных
ячеек на 100 мл.
4.4. Если наличие БГКП не допускается в 1 г продукта, то для исследования
берется 10 мл из разведения 1:10 и добавляется к 90 мл среды BiMedia 160B.
4.5. Если наличие БГКП не допускается в 10 г продукта, то для
исследования берется 10 мл из разведения 1:1 и добавляется по 5 мл гомогената в
две измерительные ячейки к 5 мл среды 160В двойной концентрации.
Возможен также альтернативный вариант при использовании измерительных
ячеек на 100 мл.
4.6. Если наличие БГКП не допускается в 10 г продукта, то для
исследования берется 10 мл из разведения 1:5 и добавляется к 50 мл среды
BiMedia 160B двойной концентрации.
5. Тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями
(не переворачивать ячейку!).
6. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с
10 мл среды BiMedia 160B (без инокулята).
7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement)
и начать измерения.
8. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как
свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Bac
Trac".
Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки
ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса
(IDT) будут записаны автоматически.
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ:
Исследуемое количество продукта содержит единичные клетки
БГКП, и проба считается контаминированной колиформами, если изменение импеданса
превышает 5%-ное пороговое значение по М-параметру и 10%- ное пороговое
значение по Е-параметру в течение 12 ч. При положительном результате наблюдается
изменение цвета питательной среды (исходный пурпурный цвет среды меняется на желтый).
Дополнение. Если клетки БГКП находились в стрессовом состоянии (термическая обработка,
замораживание, высушивание и т.п.), то может наблюдаться более медленный рост культуры
с увеличением времени определения по М-параметру до 18 ч. В этом случае проба
считается контаминированной, если изменение импеданса превышает 5%-ное
пороговое значение по М-параметру и 10%- ное пороговое значение по Е-параметру
в течение 18 ч.
3.3. Определение сальмонелл
Определение сальмонелл возможно проводить либо на среде
BiMedia 201B, либо на среде BiMedia 205A.
3.3.1. Определение сальмонелл на среде BiMedia 201B.
1. Среда: BiMedia 201B (Rappaport-Vassiliadis) (готовится в соответствии
с инструкцией - см. гл. 10).
2. Предварительное обогащение.
Смешать необходимое количество продукта, в котором регламентируется
отсутствие сальмонелл, со стерильной 1%-ной пептонной водой или средой
Pre-Media 205А в соотношении 1:10.
Тщательно перемешать. Инкубировать в течение 14 - 16 ч при 37
-С.
Период предварительной инкубации для мясных, рыбных и молочных
продуктов составляет 7 - 8 ч при 37 -С.
3. Протокол измерения.
3.1. Установить температуру 37 -С на приборе "Bac
Trac".
3.2. В основном меню программы "Bac Trac"
установить следующие параметры:
Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters):
Время исследования (Duration) 24 ч
Масштаб измерений (Scale):
М-параметр 0 - 80%
Е-параметр 0 - 80%
Время задержки (Delay) 1 ч
Пороговые значения (Thresholds):
М-параметр 5%
Е-параметр 15%.
Проводить учет результатов по Е-параметру.
Пороговое значение по времени (Time limit) 12 ч 30 мин.
4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 10 мл среды BiMedia
201B.
5. Внести 0,1 мл предобогащенного образца в ячейку; тщательно
перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать
ячейку!).
6. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с
10 мл среды BiMedia 201B (без инокулята).
7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement)
и начать измерения.
8. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как
свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Bac
Trac". Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в
прибор.
Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT)
будут записаны автоматически.
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ:
Образец загрязнен сальмонеллами, если изменение импеданса по
Е-параметру превышает 15%-ное пороговое значение в течение 12 ч 30 мин.
9. Подтверждение Salmonella-позитивных образцов. В случае положительного
ответа на сальмонеллы проводитсяподтверждение с высевом на селективные питательные
среды в соответствии с нормативными документами. Высев производится непосредственно
из измерительной ячейки.
3.3.2. Определение сальмонелл на среде BiMedia 205A.
1. Среда BiMedia 205A (Selenite-Cystine media) (готовится в соответствии с инструкцией - см. гл.
10).
2. Предварительное обогащение. Смешать необходимое количество
продукта, в котором регламентируется отсутствие сальмонелл, со стерильной 1%-ной
пептонной водой или средой Pre-Media 205A в соотношении 1:10. Тщательно
перемешать. Инкубировать в течение 16 - 18 ч при 37 -С.
3. Протокол измерения.
3.1. Установить температуру 37 -С на приборе "Bac
Trac".
3.2. В основном меню программы "Bac Trac"
установить следующие параметры:
Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters):
Время исследования (Duration) 24 ч
Масштаб измерений (Scale):
М-параметр 0 - 30%
Е-параметр 0 - 30%
Время задержки (Delay) 1 ч
Пороговые значения (Thresholds):
Е-параметр 10%
М-параметр 5%.
Проводить учет результатов по Е-параметру.
Time limit (пороговое значение по времени) 23 ч.
4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 10 мл среды BiMedia
205A.
5. Добавить 0,1 мл предобогащенного образца в ячейку;
тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать
ячейку!).
6. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с
10 мл среды BiMedia 205A (без инокулята).
7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement)
и начать измерения.
8. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как
свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Bac
Trac".
Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки
ячеек в прибор.
Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT)
будут записаны автоматически.
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ:
Образец загрязнен сальмонеллами, если изменение импеданса превышает
10%-ное пороговое значение по Е-параметру и 5%-ное пороговое значение по
М-параметру в течение 23 ч.
9. Подтверждение Salmonella-позитивных образцов. В случае положительного
ответа на сальмонеллы проводится подтверждение с высевом на селективные питательные
среды в соответствии с нормативными документами. Высев производится непосредственно
из измерительной ячейки.
3.4. Определение энтерококков
1. Среда BiMedia 301А (готовится в соответствии с инструкцией
-см. гл. 10).
2. Протокол измерения.
2.1. Установить температуру 37 -С на приборе "Bac
Trac".
2.2. В основном меню программы "Bac Trac"
установить следующие параметры:
Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters):
Время исследования (Duration) 24 ч
Масштаб измерений (Scale):
М-параметр 0 - 50%
Е-параметр 0 - 50%
Время задержки (Delay) 1 ч
Пороговые значения (Thresholds):
М-параметр 5%
Е-параметр 10%.
Проводить учет результатов по М-параметру.
Пороговое значение по времени (Time limit) 23 ч.
3. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды
BiMedia 301А.
4. Добавить исследуемый образец из соответствующего
разведения продукта, в котором не допускается наличие энтерококков.
5. Тщательно перемещать содержимое, вращая ячейку между ладонями
(не переворачивать ячейку!).
6. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с
10 мл среды BiMedia 301А (без инокулята).
7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement)
и начать измерения.
8. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как
свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Bac
Trac".
Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки
ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса
(IDT) будут записаны автоматически.
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ:
Образец загрязнен энтерококками, если изменение импеданса превышает
5%-ное пороговое значение по М-параметру и 10%-ное пороговое значение по
Е-параметру в течение 23 ч.
3.5. Определение Staphylococcus aureus
1. Среда BiMedia (Pre-Media 350A и BiMedia 350A) (готовится в соответствии с инструкцией - см. гл. 10).
2. Приготовление образца.
Смешать 10 г продукта со стерильной водой в соотношении 1:10,
затем тщательно гомогенизировать образец.
3. Предварительное обогащение.
Добавить необходимое количество суспензии продукта, в котором
регламентируется отсутствие Staphylococcus aureus (например, 10 мл суспензии,
если Staphylococcus aureus определяется в 1 г продукта, и 1 мл суспензии, если
Staphylococcus aureus определяется в 0,1 г продукта, к 90 мл или 9 мл среды
Pre-Media 350А соответственно).
Инкубировать образец 24 ч.
4. Протокол измерения.
4.1. Установить температуру 37 -С на приборе "Bac
Trac".
4.2. В основном меню программы "Bac Trac"
установить следующие параметры:
Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters):
Время исследования (Duration) 24 ч
Масштаб измерений (Scale):
М-параметр 0 - 30%
Е-параметр 0 - 30%
Время задержки (Delay) 1 ч
Пороговые значения (Thresholds):
Е-параметр 10%
М-параметр 5%.
Проводить учет результатов по Е-параметру.
Пороговое значение по времени (Time limit) 23 ч.
5. Добавить в каждую измерительную ячейку по 10 мл среды BiMedia
350A.
6. Добавить 0,1 мл предобогащенного образца в ячейку;
тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать
ячейку!).
7. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с
10 мл среды BiMedia 350A (без инокулята).
8. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement)
и начать измерения.
9. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как
свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Bac
Trac".
Примечание.
Время между внесением предобогащенных образцов в ячейки и загрузкой
измерительных ячеек в инкубаторный блок не должно превышать 15 мин. В случае
превышения данного интервала времени могут быть получены ложные результаты!
Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки
ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT)
будут записаны автоматически.
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ:
Образец загрязнен Staphylococcus aureus, если изменение импеданса
превышает 10%-ное пороговое значение по Е-параметру в течение 23 ч.
10. Подтверждение Staphylococcus aureus - позитивных
образцов. В случае положительного ответа на Staphylococcus aureus проводится подтверждение
в соответствии с нормативными документами (постановка коагулазного, каталазного
тестов и теста гемагглютинации). Материал берется непосредственно из измерительной
ячейки.
Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6
|