Частицы вирусные - см. Вирионы.
Частицы Дейна - вирионы вируса гепатита В. См. Гепаднавирусы
Чашки Петри (бактериологические) - круглые мелкие емкости с плоским дном и крышкой, края к-рых заходят снаружи за вертикальную стенку и достигают дна. Изготовляют из стойкого стекла или пластмассы разных размеров, чаще диаметром 10 см. Стеклянные чашки стерилизуют сухим жаром или в автоклаве, как всю лабораторную посуду. Пластмассовые чашки стерилизуют на заводе-изготовителе и используют одноразово. Ч.П. применяют как резервуар для плотных питательных сред. Питательную среду расплавляют на водяной бане, охлаждают до 50°С, приоткрывают край Ч.П. и наливают 15 - 20 мл среды так, чтобы образовался равномерный слой толщиной 4 - 5 мм. На 10-15 мин Ч.П. оставляют неподвижными на ровной горизонтальной поверхности, а затем, сняв крышку, подсушивают среду на открытом воздухе в асептических условиях в течение 30 мин или при 37°С в течение 15 - 20 мин. При посеве к-ры сплошным газоном высушивание необязательно.
Чистая культура - совокупность микробов одного вида или варианта, полученная из одного образца материала и содержащаяся в определенном объеме среды (напр., в пробирке). Ч.к. из колонии обладает высокой однородностью св-в, поскольку она обычно происходит из одной особи. Ч.к., полученная путем селективной обработки материала, содержащего смесь микробов, менее однородна. См. Культура бактериальная.
Чувствительность - св-во организмов реагировать на абиогенные и биогенные факторы внешней среды, нередко с нарушением структуры, функции и поведения. Ч. хозяина к паразитам обозначают термином «восприимчивость» (см.).
Чувствительность микроорганизмов к химиопрепаратам - св-во микроорганизмов реагировать на действие химиопрепаратов приостановкой размножения или гибелью. Каждый вид или близкая группа видов имеют характерный спектр и уровень естественной (природной) Ч. по отношению к определенному препарату или группе препаратов. В чувствительных популяциях в результате мутации, рекомбинации или иммиграции закономерно появляются особи с более узким спектром и более низким уровнем Ч., к-рые в селективных условиях среды могут стать доминирующими в популяции. Такие особи и популяции называются устойчивыми (см. Антибиотики). С научной биол.-статистической точки зрения к чувствительным относят к-ры, растущие на средах с концентрациями, не превышающими Х±2а, и не растущие на средах, превышающих эту концентрацию. К-ры или популяции, рост к-рых не подавляется на средах с концентрацией препарата больше Х±2с, относят к устойчивым. В химиотерапии подход к определению чувствительности-устойчивости микроорганизмов иной, поскольку возможность создания концентрации химиопрепарата в крови и др. тканях животного организма лимитируется рядом факторов, и прежде всего токсическим или др. побочным действием химиопрепарата на организм. Поэтому в качестве критерия чувствительности-устойчивости микроорганизмов к химиопрепаратам избирают их терапевтические концентрации в крови и др. биотопах животного организма. Мерой Ч. микробов в указанном случае является минимальная концентрация препарата (мкг/мл), к-рая подавляет рост микробов на питательных средах в стандартных условиях постановки опыта (МИК). Исходя из отношения между МИК и концентрацией препарата в крови при введении терапевтических доз, в клин, химиотерапии выделяют 3 категории чувствительности-устойчивости микробов (см. Методические указания, 1983, 1991). К чувствительным относят штаммы, рост к-рых подавляется концентрациями препарата, создаваемыми в с-ке крови б-ного в процессе назначения обычных терапевтических доз антибиотиков. Умеренно-устойчивыми 'считаются штаммы, подавляемые концентрациями, к-рые могут быть достигнуты при введении максимальных терапевтических доз препарата. К устойчивым предложено относить штаммы, рост к-рых не подавляется концентрациями препарата, создающимися введением максимально допустимых доз. Указанные категории предложены для испытания полуколичественным м-дом дисков В методиках серийных разведении возможна количественная оценка чувствительности-устойчивости (МИК), к-рая сопоставляется с рекомендуемыми терапевтическими дозами. Для получения достоверных результатов испытания на Ч.м. необходимо соблюдение ряда условий, в частности: 1) испытывают в основном чистые к-ры выделенных микробов. Смешанные к-ры из-за неодинаковых темпов роста и межвидовой конкуренции часто дают искаженные результаты; 2) из каждого материала проверяют Ч. нескольких к-р одного вида или их смесь. При системных моноэтиологичных заболеваниях и закрытых внебольничных процессах выборка может состоять из 2-3 к-р. Открытые процессы, особенно вызванные условно-патогенными микробами, требуют большей выборки - 5-10 к-р; 3) в связи с изменением состава популяции в процессе инфекции испытание на Ч.м необходимо повторять каждые 5 - 7 дней; 4) в случаях ассоциированной инфекции предпочтение отдают испытанию Ч.м. у видов и вариантов, занимающих доминирующее и субдоминирующее положение в микробиоценозах; 5) испытанию на Ч. подлежат к-ры, выделенные из первичного или вторичного микробного очага. В настоящее время для определения Ч. м. применяют 3 м-да: диффузии препарата в агар из бумажных дисков (дискодиффузионный), серийных разведении в бульоне и в плотной питательной среде. Определение Ч.м. к химиопрепаратам регламентировано Методическими указаниями по применению унифицированных клинических лабораторных исследований, утвержденными приказом МЗ СССР № 250 от 13.03.75 г.; Указаниями по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков, изданными в марте 1983 г.; методическим руководством «Эпидемиологический надзор за лекарственной устойчивостью основных возбудителей инфекционно-воспалительных заболеваний и тактика антибактериальной терапии» (1991). Для определения Ч.м. необходимы стандартные заводские диски из специальной бумаги. Кустарное производство дает ненадежные результаты. Питательные среды для определения Ч.м. должны быть стандартными; обеспечивать оптимальные условия для роста микробов; не содержать ингибиторов роста и избыточного количества его стимуляторов, а также веществ, подавляющих противомикробное действие антибиотиков; иметь нейтральную или слабощелочную рН(7,0 -7,4). Для бактерий, растущих на простых питательных средах, используют бульон и 1,5 - 2% агар Хоттингера, МПБ и 1,5-2% МПА, среду АГВ. Для стрептококков и гемофильных бактерий применяют те же среды с добавлением дрожжевого гидролизата. Ч. дрожжей определяют на Сабуро средах (см.), анаэробов - в специальных средах и анаэробных условиях. При определении Ч. псевдомонад необходимо присутствие в питательной среде ионов кальция и магния. Эти ионы оказывают влияние на уровень Ч. др. микробов к ряду антибиотиков, поэтому желательно, чтобы все среды содержали ионы этих элементов. Оптимальное их содержание в средах - 50 мг/л ионов кальция и 25 мг/л ионов магния. Иссл. чистые к-ры, взятые из 5-10 колоний, выращивают 18 - 20 ч на МПА, готовят смесь плотностью в 10 ЕД оптического стандарта на физрастворе и разводят в 10 раз. Ход исследования: на поверхность плотной среды наливают 2 мл иссл. к-ры и покачиванием чашки равномерно распределяют ее по всей поверхности среды, остаток отсасывают пипеткой. Среду подсушивают 20 - 30 мин при комнатной температуре, после чего на поверхность газона стерильным пинцетом накладывают диски (не более 6 на чашку) на расстоянии 2 см друг от друга и от краев чашки. Инкубируют в термостате 24 -48 ч при 37°С (при определении метициллина и оксациллина - при 35°С). В падающем свете, на фоне темной матовой поверхности измеряют диаметр (с учетом диаметра диска) задержки роста. Оценку результатов проводят по таблице, приведенной в упомянутой инструкции 1991 г. Диаметры зон задержки роста испытанных штаммов сравнивают с пограничными значениями в таблице и относят их к одной из 3 категорий чувствительности-устойчивости. Для сокращения объема работы ВОЗ предлагает использовать класс-диски, содержащие один из антибиотиков близкой по спектру группы. Ценным в этом плане является предложенное авторами инструкции от 1983 г. предварительное испытание Ч. м. путем прямого посева патологического материала. Для контроля точности и стандартности исследований ВОЗ рекомендует параллельно с иссл. к-рами включать в опыт тест-к-ры кишечной палочки АТСС 25292, золотистого стафилококка АТСС 25923, синегнойной бактерии АТСС 27853. Для получения количественных результатов о Ч.м. используют м-ды серийных разведении. М-д серийного разведения препарата в бульоне основан на определении способности растворенного в питательном бульоне препарата вызывать гибель или ингибировать рост находящихся в нем микробов. Для постановки опыта необходимы основные р-ры антибиотиков в дистил. воде, бульон Хоттингера или др. питательный бульон и 18-часовая бульонная к-ра иссл. штамма с примерной плотностью в 10 м.т./мл. Ход исследования: из основных разведении препаратов готовят ряды в объеме 1 мл серийных разведении (по числу иссл. к-р), кратные 2, захватывающие все уровни чувствительности-устойчивости, причем для каждого разведения нужна отдельная пипетка. Во все разведения 1-го ряда доливают по 1 мл первой иссл. к-ры, 2-го ряда - по 1 мл второй к-ры и т.д. Концентрация препарата в результате этого уменьшается в 2 раза. Контроль содержит 1 мл к-ры каждого иссл. штамма и 1 мл бульона. Инкубируют при 37°С до следующего дня. Определяют МИК, к-рая соответствует концентрации препарата в последней пробирке с видимой задержкой роста. Если необходимо установить бактерицидное действие МБК, из нескольких пробирок с задержкой роста делают высев петлей на секторы чашки с МПА. Инкубируют до следующего дня и учитывают рост. За МБК принимают концентрацию препарата в последней пробирке, высев из к-рой не дал роста. М-д серийных разведении в плотной питательной среде базируется на способности растворенного в плотной питательной среде препарата ингибировать рост нанесенных на него микробов. По сравнению с м-дом серийных разведении в жидкой среде более производителен, чувствителен и точен. Производительность, экономичность и надежность м-да резко возрастают, если иссл. к-ры наносить специальным штампом-репликатором с 25 - 50 штифтами. Ход исследования: для опыта в бутылочках заготавливают мерное количество стерильного агара Хоттингера или МПА и 3 основные концентрации антибиотиков исходя из уровней Ч. м. В расплавленный и охлажденный до 60°С агар добавляют нужное разведение антибиотика, равное 1/10 среды (концентрация антибиотика соответственно уменьшается в 10 раз), тщательно перемешивают и разливают по чашкам, на дне к-рых заранее должны быть указаны название и концентрация антибиотика и проведена горизонтальная черта, обозначающая «верх». Посев лучше проводить штампом-репликатором. Для этого в лунки штампа пастеровской пипеткой вносят по 5 капель 3 -4-часовой бульонной к-ры, стандартизированной по стандарту мутности в 5 ЕД. Штифты штампа опускают в лунки, смачивают к-рой и легким прикосновением переносят на поверхность агара с антибиотиками (м-д реплик). Для посева на каждую новую чашку штифты вновь смачивают в лунках с к-рой. Перед посевом на агар антибиотиками делают отпечаток к-р на среду без препарата (контроль). Посевы инкубируют в термостате при 37°С до следующего дня (до появления роста на контроле). Учет производят с помощью бумажных матриц: на них тушью нанесены цифры от 1 до 25 или 50 (в зависимости от штампа). При учете результатов посева дно чашки накладывают на матрицу так, чтобы линия «верх» совпадала с верхним рядом отпечатков, а зоны отпечатков - с цифрами. Удобно работать с 3 матрицами, чтобы последовательно учитывать Ч. к-ры на всех 3 концентрациях препарата. К-ра считается чувствительной, если в зоне отпечатков нет ни одной колонии. Микроорганизмы, рост к-рых подавлен всеми 3 концентрациями, рассматривают как чувствительные, 2-й и 3-й концентрациями - как среднечувствительные, 3-й - как умеренно устойчивые; микроорганизмы, растущие на всех 3 концентрациях, относят к устойчивым. При различии в уровнях устойчивости у к-р, выделенных из одного патологического материала, общую оценку устойчивости популяции делают по наиболее устойчивой к-ре. Кроме классических методов, дающих ответ относительно поздно, предложены ускоренные м-ды определения Ч.м., в т.ч. автоматизированные, позволяющие получить ответ через 3-10 ч от начала исследования. Достоверность их в силу ряда причин ниже классических м-дов, что, однако, компенсируется быстрым получением ответа.
Пограничные данные диаметра зон задержки роста и значений для интерпретации результатов испытания на Ч. м.
____________________________________________________________________________________
Антибиотики (цвет диска) Диаметры зон (мм) Диаметры зон (мм) для среды АГВ
для среды АГВ
___________________________________________________________________
устойчивые умеренно чувствительные устойчивые чувствительные
устойчивые
__________________________________________________________________________________________
Бензилпенициллин (белый) <20 21-28 >29 >25 <12
при испытании стафилококков
Бензилпенициллин (белый)
при испытании стафилококков <10 11-16 >17 - -
Ампициллин (белый) при
испытании стафилококков <20 21-28 >29 >0,5 <25
при испытании грам-
бактерий и энтерококков <9 10-13 >14 >32 <8
Карбенициллин при
испытании кишечной
палочки и протея (белый) <14 15-18 >19 >64 <16
при испытании
синегнойной палочки
(голубой) <11 12-14 >15 >256 <28
Метициллин (белый) <13 14-18 >19 >16 <8
Оксациллин (белый) <15 16-19 >20 <4 <2
Цефалексин (белый) - - - >32 <8
Цефалотин (белый) <14 15-18 >19 >32 <8
Стрептомицин (белый) <16 17-19 >20 >16 <8
Неомицин (белый) <12 13-16 >17 - <10
Канамицин (белый) <14 15-18 >19 >64 <16
Гентамицин (белый) <15 - >16 >16 <4
Сизомицин (белый) - - - >16 <4
Тетрациклин (светло-желтый) <16 17-21 >22 >8 <2
Доксициклин (белый) - - - >16 <4
Эритромицин (белый) <17 18-21 >22 >8 <0,5
Олеандомицин (белый) <16 17-20 >21 - -
Линкомицин (белый) <19 20-23 >24 >8 <2
Левомицетин (белый) <15 16-18 >19 >32 <8
Рифампицин (оранжевый) <12 13-15 >16 >8 <2
Фузидин (белый) - - - >16 <2
Полимиксин (белый) <11 12-14 >15 - -
Ристомицин (белый) <9 10-11 >12 >32 <4
Чума - тяжелое острое инфекц. заболевание человека и животных из группы ООИ, вызываемое Yersinia (см.) pestis. Возбудитель представляет собой грам- палочковидные или овоидные неподвижные, образующие нежную капсулу (непостоянно) бактерии размерами 0,3 - 0,5x1-2 мкм. Часто дают инволюционные формы. Молодые к-ры окрашиваются биполярно. Оптимальная температура роста - 28°С (хотя могут расти в пределах 2-40°С), рН 6,9 - 7,0. На мясных средах рост появляется только при посеве большой дозы, обычно на 1 -2-й день. На плотных средах формируют шероховатые колонии, в жидких средах - пленку на поверхности, от к-рой ко дну тянутся слизистые нити; в последующем образуется осадок. Ферментируют с выделением к-ты ксилозу, синтезируют плазмокоагулазу, фибринолизин, гемолизин, лецитиназу, РНК-азу, сероводород. Пробы на гидролиз мочевины, ферментацию рамнозы, адонита, арбутина отрицательны. В зависимости от ферментации глицерина выделяют «+» и «-» варианты. Содержит соматические и поверхностные Аг, в т.ч. Аг V-W, с к-рым связывают вирулентность микроба. Выделяют в среду токсин. Паразиты млекопитающих. Клиника Ч. довольно характерна, тем не менее бактериол. д-ка обязательна во всех случаях. Ее проводят в специальных противочумных лабораториях при строгом соблюдении правил, исключающих заражение персонала и вынос возбудителя за пределы лаборатории. Используют бактериол. и экспериментальный м-ды. Исследуют кровь, мокроту, пун-ктат из бубона, отделяемое кожных поражений. Посуду с материалом заворачивают в салфетки, смоченные дезинфектантом, помещают в металлический контейнер, опечатывают и с доверенным лицом доставляют в ближайшее противочумное учреждение. В лаборатории из материала готовят мазки, обрабатывают противочумной люминесцирующей с-кой и окрашивают щелочной синькой Леффлера (см. Красители) и по Граму. Подозрительными на Ч. являются положительная РИФ, а также присутствие в мазках грам- овоидных биполярно окрашенных беспорядочно расположенных палочек. К-ру выделяют посевом на агар и бульон Хоттингера или элективные среды. При посеве загрязненного материала к средам добавляют натрия сульфат и генцианвиолет в конечных разведениях 1:40 и 1:100 тыс. Среды инкубируют при 28 -30°С. Через 12 - 20 ч из подозрительных колоний (серовато-белые с плотным центром и полупрозрачной изрезанной периферией) делают отсев на скошенный МПА. Для идентификации используют выявление описанных выше признаков, решающие из к-рых - результаты биопробы. Для дифференциации с возбудителем псевдотуберкулеза определяют лизис чумным фагом, подвижность в придавленной капле, рост на голодном агаре, ферментацию рамнозы и мочевины. Биопробу ставят на морских свинках. При внутрибрюшинном заражении животные погибают на 3 -5-е сутки. Экссудат из брюшной полости, кровь, со-скоб из внутренних органов засевают на среды для выделения чистой к-ры. В мазках из этих материалов в положительных случаях обнаруживают огромное количество типичных палочек.
