Класс жгутиковые: лейшмании, трихомонады, лямблии, трипаносомы

также в периферической крови. В поздний период лихорадки или по окончании

его трипаносом обнаруживают в пунктате увеличенных лимфатических узлов. В

период проявления симптомов поражения центральной нервной системы

паразитов, в крови и в лимфатических узлах нет. На этой стадии болезни

более эффективно исследование спинномозговой жидкости.

[pic]

Для обнаружения трипаносом исследуют свежие или окрашенные препараты. В

первом случае каплю крови, смешанную с цитратом, пунктат лимфатического

узла или спинномозговой жидкости помещают на предметное стекло, накрывают

покровным стеклом и микроскопируют. Подвижных трипаносом можно заметить

даже при малом увеличении микроскопа, хотя лучше их видно при большом

увеличении. Более распространенным является исследование постоянных

окрашенных по Романовскому препаратов, для чего готовят мазки и толстые

капли обычным способом. В окрашенных препаратах трипаносомы легко

распознаются среди клеточных элементов. При окраске по Романовскому тело

трипаносом окрашивается в голубоватый цвет, ядро и жгуты— в красный. На

препарате можно видеть мембрану, соединяющую волнообразно извитой жгутик с

краем тела.

Если в свежих или окрашенных препаратах не удается обнаружить возбудителя,

используют метод заражения лабораторных животных. Наиболее чувствительны к

заражению трипаносомами белые мыши, у которых после введения исследуемого

материала подкожно или внутримышечно уже на 2—3-й день в крови появляются

паразиты.

При американском трипаносомозе возбудитель обнаруживается в острой стадии

болезни в периферической крови в свежих или окрашенных по Романовскому

препаратах. Однако по сравнению с африканской формой болезни число

трипаносом здесь значительно меньше, поэтому требуется просматривать

большое число препаратов. В хронической стадии паразиты в крови встречаются

очень редко, поэтому исследование периферической крови бывает

малоэффективным. В таких случаях рекомендуется заражение белых мышей или

морских свинок, а также посевы на питательные среды. С целью диагностики

используют серологические реакции: связывания комплемента, агглютинации,

флюоресцирующих антител.

Лямблии

Строение.

Лямблия (Lamblia intestinalis) впервые была описана русским ученым Д. Ф.

Лямблем (1859), в честь которого она и получила свое название.

Лямблия существует в виде вегетативной формы (трофозоит) и цисты (рис. 10).

Вегетативная форма активная, подвижная, грушевидная, передний конец тела

закруглен, задний заострен. Длина 9—18 мкм. В передней части тела находится

присасывательный диск в виде углубления. Имеет 2 ядра, 4 пары жгутиков.

Жгутики, проходя частично в цитоплазме, образуют два хорошо видимых при

окраске продольных пучка.

[pic]

Рис № 10 Лямблии

При наблюдении в живом состоянии движение очень характерное, паразит все

время переворачивается боком за счет вращательного движения вокруг

продольной оси. В препарате при комнатной температуре лямблии быстро

погибают. Пищу всасывают всей поверхностью. Размножаются продольным

делением.

Цисты — это неподвижные неактивные формы паразита. Длина 10—14 мкм. Форма

овальная. Оболочка сравнительно толстая, хорошо очерчена, часто в

значительной своей части как бы отслоена от тела самой цисты. Этот признак

помогает отличать цисты лямблий от других сходных образований.

В растворе Люголя окрашиваются в желтовато-коричневатый цвет. Окрашивание

позволяет видеть в зрелой цисте 4 ядра.

Цикл развития.

Обитают в верхнем отделе тонкого кишечника. С помощью присасывательного

диска прикрепляются к ворсинкам. В желчном пузыре лямблий не живут, так как

желчь на них действует губительно. Частое обнаружение их при дуоденальном

зондировании объясняется тем, что лямблий попадают в содержимое

двенадцатиперстной кишки с ее стенок.

Обычно вегетативные формы с испражнениями не выделяются, однако при

поносах их можно обнаружить в свежевыделенных жидких фекалиях. Лямблий,

попадая в нижние отделы кишечника, где условия для них неблагоприятные,

превращаются в цисты, которые и выделяются обычно с испражнениями.

Цисты хорошо сохраняются во внешней среде, в зависимости от влажности и

окружающей температуры — до месяца; при высушивании погибают очень быстро.

Заражение может произойти через загрязненные руки, игрушки, пищу и воду.

Цисты, попадая в кишечник, превращаются там в вегетативные формы. Одна

циста образует две вегетативные формы.

Клиника.

Лямблии распространены очень широко, особенно часто они встречаются у

детей. По мнению некоторых ученых, лямблии, особенно при большом их числе,

могут вызывать механическое раздражение слизистой оболочки кишечника, в

определенной степени затруднять всасывание жиров и жирорастворимых

витаминов. При этом могут возникать нерезкие боли в животе, расстройство

стула, снижение аппетита, иногда боли в правом подреберье (лямблиоз). В

некоторых случаях лямблии могут ухудшить течение других заболеваний

кишечника и желчных путей. Ряд ученых считают лямблии непатогенными. Таким

образом, вопрос о патогенности лямблии в настоящее время окончательно не

решен.

Диагностика.

Обнаружить лямблии у зараженного человека обычно сравнительно легко.

.

Исследование желчи.

Желчь и содержимое двенадцатиперстной кишки, полученные при дуоденальном

зондировании, осматривают и выбирают комочки слизи на предметное стекло и

микроскопируют. Кроме того, материал центрифугируют, просматривают под

микроскопом осадок. Этим методом можно обнаружить вегетативные стадии

лямблий. В свежевыделенном материале, полученном при дуоденальном

зондировании, можно обнаружить подвижные вегетативные формы.

Исследование испражнений/

Сбор материала. Фекалии исследуют с целью обнаружения простейших

кишечника.

Движение простейших — одно из самых характерных и отличительных свойств,

которое позволяет поставить правильный диагноз. Поэтому основное правило,

которое необходимо неукоснительно выполнять — это подвергать исследованию

только свежий материал. Промежуток времени от момента выделения до

исследования не должен превышать 30 мин., т. е. в лабораторию должны

доставляться фекалии в теплом виде. Под термином “теплые фекалии” надо

понимать фекалии, не остывшие после выделения их из организма, но отнюдь не

подогретые искусственно. Исследование оформленных испражнений допускается в

течение 2 ч после выделения.

Исследуемый материал собирают в чистую сухую посуду. Наиболее подходящими

для этой цели являются картонные парафинированные стаканчики, которые после

одноразового использования сжигают. Если фекалии собирают в стеклянную или

фарфоровую посуду, то перед употреблением ее стерилизуют кипячением.

Вегетативные формы простейших весьма чувствительны к химическим

веществам, и если в посуде, куда собирают : фекалии, остаются следы

дезинфицирующих веществ, простейшие быстро погибают и распознавание их

становится трудным, а иногда и невозможным.

Доставленный в лабораторию материал прежде всего подвергают

макроскопическому осмотру. При этом отмечают консистенцию кала, наличие

слизи и крови. Если в лабораторию доставлено одновременно несколько проб

фекалий, в первую очередь подлежат исследованию неоформленные фекалии с

патологическими примесями/

Сохранять пробу до исследования надо при обычной температуре в вытяжном

шкафу. Помещать в термостат не следует, так как при повышенной температуре

быстрее происходит размножение бактерий, больше образуется продуктов

метаболизма, что приводит к быстрой дегенерации простейших.

При каждом анализе испражнений с целью обнаружения простейших кишечника

обязательным является исследование нативного препарата и мазка, окрашенного

раствором Люголя.

Нативный мазок. Жидкие кровянисто-слизистые испражнения без видимой

примеси фекальных масс могут быть исследованы без добавления изотонического

раствора хлорида натрия. Деревянной палочкой каплю испражнений переносят на

предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Пользоваться стеклянными

палочками не рекомендуется, так как ими невозможно набирать слизистые

комочки, в которых находятся простейшие. Правильно приготовленный препарат

должен быть опрятным, покровное стекло должно плотно прилегать к

предметному с равномерным распределением жидкости между стеклами без ее

выступания за пределы покровного стекла. Мазок должен быть умеренной

толщины. Густой мазок малопрозрачен и его трудно микроскопировать, если же

взято слишком мало фекалий, то мазок получится разведенным и простейших

можно не обнаружить. Через правильно приготовленный мазок должен быть виден

печатный текст.

Микроскопическое исследование свежего мазка нужно проводить, обязательно

соблюдая следующие правила:

1) освещение препарата не должно быть ярким. Правильное освещение

достигается соответствующим положением конденсора, который

опускают тем больше, чем сильнее источник света. Используют также

светофильтр;

2) препарат просматривают сначала под малым увеличением микроскопа

(X 10), а потом с сухой системой большого увеличения;

3) передвигать препарат надо с таким расчетом, чтобы не пропустить

какие-либо участки мазка или не попасть повторно на уже

просмотренное место.

При правильном освещении даже под малым увеличением можно увидеть

вегетативные стадии и цисты лямблий. После ориентировочного просмотра под

малым увеличением обязательно применяют большое увеличение (х10, х40).

Циста в нативном мазке отличается от вегетативной стадии постоянной

формой благодаря оболочке. Строение цист в нативном препарате плохо

заметно, невидны ядра. Поэтому для уточнения вида применяют мазок,

окрашенный раствором 'Люголя.

Окраска раствором Люголя. Раствор Люголя по унифицированной методике

рекомендуется следующего состава: йодид калия—3. г, кристаллический

йод—'1,5 г, вода дистиллированная — 100 мл. Вначале растворяют йодид калия,

затем йод. Раствор стабилен в темной склянке с притертой пробкой при

комнатной температуре не более месяца.

Цисты окрашиваются в золотисто-коричневый цвет. На фоне цитоплазмы

заметны ядра, их строение и число. Хорошо виден гликоген, окрашивающийся в

разные оттенки коричневого цвета.

Методика просмотра препарата, окрашенного раствором Люголя, такая же, как

и нативного мазка. Следует учитывать, что при окраске раствором Люголя

вегетативные стадии погибают и определяются с трудом.

Так, если фекалии оформленные, то в нативном мазке при микроскопии ( х

400) обнаруживают цисты. Сочетание методов копроскопии и дуоденального

зондирования повышает частоту выявления лямблиоза.

Следует отметить, что широкое распространение лямблии (носительство)

нередко вводит в заблуждение и вызывает гипердиагностику лямблиоза. Поэтому

при наличии клинической картины поражения желудочно-кишечного тракта или

желчных путей необходимо исключить другие возможные причины заболевания,

например провести бактериологические исследования.

Трихомонады.

Виды.

У человека обитают три вида трихомонад (рис. 11):Trichomonas hominis—

кишечная, обитающая в толстом кишечнике; Trichomonas tenax— ротовая,

обитающая в полости рта; Trichomonas vagimalis— влагалищная, паразитирующая

в мочеполовых путях.

[pic]

Рис № 11. Трихомонады

а- трихомонада влагалищная, б- трихомонада кишечная, в- трихомонада

ротовая.

Строение.

Кишечная трихомонада имеет грушевидное тело длиной 8—20 мкм. От

переднего конца тела отходят обычно 5 жгутиков. С одной стороны тела по

всей его длине расположена волнообразна; перепонка (ундулирующая мембрана),

по наружному краю которой про ходит тонкая нить, выступающая своим

свободным концом в виде жгутика. В цитоплазме при окраске видны ядро и

осевая нить. Движение трихомонады активное, беспорядочное, “суетливое”.

Наряду с поступательным движением трихомонады вращаются вокруг продольной

оси. Мембрану удается заметить только при замедлении движения трихомонады

или при ее остановке в виде периодически пробегающих волн по одной из

сторон тела. Размножается делением. Цист не образует. Обитает в толстом

кишечнике человека. В жидких испражнениях может обнаруживаться в очень

больших количествах. В ряде случаев играет определенную роль в развитии или

ухудшении течения заболеваний толстого кишечника, особенно у детей раннего

возраста.

Ротовая трихомонада по строению похожа на кишечную, ее длина 6—13 мкм,

ундулирующая мембрана не достигает конца тела. Цист не образует.

Патогенное значение не доказано, хотя и имеются данные о значительно

более частой встречаемости у лиц с различными заболеваниями полости рта и

зубов (гингивит, пародонтоз, кариес зубов) и о неблагоприятной роли этих

простейших в поддержании патологического процесса. Некоторые исследователи

обнаруживали трихомонад в мокроте больных легочными заболеваниями, а также

в удаленных хирургическим путем бронхоэктазах и абсцессах легких. Все это

заставляет обратить внимание на необходимость более широкого применения

лабораторных методов исследования с целью выявления ротовых трихомонад в

стоматологических и терапевтических медицинских учреждениях.

Трихомонад обнаруживают при микроскопии нативных или окрашенных мазков из

соскоба ротовой полости (с зубов, десен, из очагов воспаления и нагноения),

в бронхиальной слизи и мокроте. Выявляемость увеличивается с применением

методов посева на питательные среды.

Влагалищная трихомонада имеет грушевидное тело длиной 14—30 мкм (см. рис.

12).

[pic]

Рис № 12. Трихомонада влагалищная

I – мазок на культуры,II- мазок из влагалища, III- мазок из влагалища (

окраска метиленовым синим) а- трихомонада: 1 ядро, 2 базальные тельца, 3

передние жгутики, 4 ундулирующая мембрана, 5 аксостиль, 6 парабазальная

нить, 7 лейкоциты. в – эпителиальные клетки.

На переднем конце тело имеет 4 жгутика и ундулирующую мембрану, доходящую

только до середины тела. Ближе к переднему концу располагается ядро. Сквозь

все тело проходит осевая нить (аксостиль), выступающая на заднем конце в

виде шипика. Цитоплазма содержит вакуоли. Цист не образует, во внешней

среде быстро погибает. Играет заметную роль в патологии мочеполовой

системы, особенно у женщин. Наблюдается и длительное бессимптомное

носительство, чаще у мужчин. Основными симптомами заболевания, которое

называется мочеполовым трихомонозом, являются зуд, боль, жжение, серозно-

гнойные выделения (бели).

Трихомонады этого вида передаются лишь половым путем. Иногда

высказываемое мнение о том, что трихомонады могут переселиться во влагалище

из кишечника, неверно, так как кишечная и влагалищная трихомонады — это

разные виды с различными требованиями к условиям среды обитания. Диагноз

ставят при обнаружении трихомонад в выделениях мочеполовых путей методом

микроскопии нативных или окрашенных по Романовскому мазков

Диагностика.

Исследование выделений мочеполовых путей.

При воспалительных заболеваниях мочеполовых путей обязательно

исследование на наличие влагалищных трихомонад.

Патологические выделения у женщин берут для исследования с помощью

влагалищных зеркал и тампона со слизистой оболочки влагалища или из его

заднего свода, а при обилии выделений — с наружных половых органов или с

пальца резиновой перчатки после осмотра больной врачом.

Из уретры получают материал с помощью специальной ложечки, которую вводят

до сфинктера.

У мужчин до мочеиспускания из уретры выдавливают каплю выделений. Для

исследования мочевого пузыря мочу получают катетером и микроскопируют

осадок после ее центрифугирования.

Во всех случаях 1—-2 капли выделений необходимо сразу же поместить в

каплю изотонического раствора хлорида натрия на предметном стекле, накрыть

покровным стеклом и исследовать при среднем увеличении (Х40, х10) с сухой

системой.

В препарате, приготовленном указанным способом, вследствие быстрого

высыхания подвижность трихомонад вскоре прекращается. Поэтому рекомендуют

готовить препарат по типу “висячей капли”. В получающейся при этом влажной

камере, где благодаря вазелиновой прокладке создается герметичность и

замедляется высыхание препарата, подвижность трихомонад может наблюдаться

иногда в течение часа. Это дает возможность готовить препараты в

процедурном кабинете и направлять их в лабораторию (в холодное время года

препараты надо доставлять в утепленном биксе).

В нативном препарате трихомонады легко отличаются от лейкоцитов и других

клеток по движению, а также по наличию жгутов и ундулирующей мембраны.

Более четко трихомонады видны при исследовании в темном поле или при фазово-

контрастной микроскопии. В несвежем или подсохшем мазке трихомонады быстро

прекращают свое движение, и в таком случае их определение становится

практически невозможным.

Для диагностики трихомонадного поражения из исследуемого материала в

процедурном кабинете готовят мазки и направляют в лабораторию, где их после

подсушивания фиксируют и красят по Романовскому.

В окрашенных препаратах достаточно четко выявляются особенности

морфологии трихомонад, что наряду с неограниченным временем исследования (в

противоположность нативному мазку, где сроки доставки и микроскопии

ограничены временем сохранения подвижности трихомонад) делает этот метод

достаточно удобным для практических условий.

Окраска по Романовскому дает лучшие результаты в модификации Н. А.

Цагикян (1954). Для этого фиксированный тонкий мазок красят 40 мин краской

следующего состава: воды дистиллированной 100 мл, 1% раствора карбоната

натрия 15 капель и краски Романовского 4 мл. По указанной модификации более

четко красятся жгутики, трихомонады становятся хорошо различимыми. Ядра

окрашиваются в фиолетово-рубиновый или фиолетовый цвет, цитоплазма—в

голубой, жгутики и некоторые другие структурные образования — в розово--

красный.

Повышению эффекта лабораторного исследования способствует просмотр

нативных и окрашенных препаратов.

Список используемой литературы.

1. Генис Д.Е. Медицинская паразитология, М. «Медицина», 1985 г

2. Воробьев А.А. Микробиология и иммунология, М. «Медицина», 1999 г.

3. Коротеев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, С-

П., 1998 г.

4. Золотницкий В.С. Руководство к практическим занятиям по эпидемиологии

и паразитологии, М. «Медицина», 1975 г.

5. Слюсарев А.А. Биология с общей генетикой, М. «Медицина», 1978 г.

6. Чернес Ф.К. Микробиология, М. «Медицина», 1987 г.

7. Ярыгин В.Н. Биология, М. «Медицина», 1980 г.

Страницы: 1, 2